NADPH細胞色素C還原酶（NCR）試劑盒可見分光光度法說明書
可見分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
產品名稱：NADPH細胞色素C還原酶（NCR）試劑盒可見分光光度法
貨號：LZ-S01262-A
規格 : 50管/48樣
測試方法:可見分光光度法
產品分類：P452系列
發貨地：上海
測定意義：
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，藥物在動物體內的I相反應主要依賴細胞色素P450酶催化完成，許多藥物能誘導或抑制細胞色素P450的活性，從而引起藥物的療效降低、中毒和殘留發生率的增加。NADPH-細胞色素C還原酶作為P450酶系的一員，負責將氧化型P450轉變成還原型。
測定原理：
NADPH-細胞色素c還原酶催化氧化型細胞色素c生成還原型細胞色素c，后者在550nm處有特征吸收峰，通過測定還原型細胞色素c的增加速率，計算NADPH-細胞色素c還原酶活性。
實驗中所需儀器及設備
可見分光光度計、普通離心機，低溫超速離心機、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水和甘油。
試劑的組成和配制：
試劑一?粉劑×1 瓶，4℃保存?臨用前加 100mL 蒸餾水充分溶解?
試劑??液體×1 瓶，4℃保存?
試劑й?粉劑×1 瓶，-20℃保存?臨用前配制，加 2.6 mL 蒸餾水充分溶解，4℃保存?
試劑四?粉劑×1 瓶，4℃保存?臨用前配制，加 550 μL 蒸餾水充分溶解，4℃保存?
NAD+和 NADH 的提取：
1 血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提取：按照血清（漿）體積（mL）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 堿性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2 組織中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：按照組織質量（g）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g組織，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提取：按照組織質量（g）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g組織，加入 1mL 堿性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取：NAD+的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入1mL 酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：堿性提取液體積（mL）500~1000：1的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規定的反應溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發,板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
生化檢測試劑盒常見問題：
在使用生化檢測試劑盒時，可能會遇到一系列常見問題，這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實驗操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法：
一、?測定原理?：生化試劑盒通過化學反應或酶促反應測定樣本中物質的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計和酶標儀，它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等樣本均可進行測定?。
?二、選擇不同規格的試劑盒?：根據實驗的實際情況選擇合適的試劑盒。如果實驗室有酶標儀且具備檢測波長，可以選擇微量法試劑盒；如果有分光光度計及相應規格的比色皿，則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細閱讀說明書，確認自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?：收到試劑盒后，如果暫時不用，應按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后，應按照每個試劑的保存溫度進行保存，注意有些試劑忌反復凍融，有些粉劑溶解后性質不穩定?。
四、?有效期?：一般生化試劑盒的有效期為6個月，也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實際收到貨物的標簽信息為準?1。
?五、樣本處理?：新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數指標的測定，但有些生理活性物質容易降解，建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本，建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時間有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一個月，-80℃保存3個月?。
?六、土壤酶活性測定?：對于土壤酶活性的測定，建議將鮮土風干并過篩后取樣，以測定的重復性。若使用鮮土測定，需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預測定?：在進行正式測定前，建議選擇2-3個預期結果差別較大的樣本做預實驗。通過預測定可以全面反映樣品特點、試劑質量、儀器設備穩定性和操作規范性，確保正式測定結果真實可靠?。
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